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接下來(lái)為你講解ELISA檢測(cè)流程之夾心法
發(fā)布時(shí)間： 2022-06-25 點(diǎn)擊次數(shù)： 3374次ELISA檢測(cè)樣本包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本,靈敏度*。在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè),對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,及時(shí)儲(chǔ)存在49C備用,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本，請(qǐng)?jiān)炷Ｈ〔暮?將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在20℃或70°C條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。ELISA檢測(cè)之夾心法：1、加樣：將標(biāo)準(zhǔn)品工作液依次加入到前兩列孔中，每個(gè)濃度的工作液并列加兩孔，每孔100μL。待測(cè)樣品加入到其他孔，每孔100μL(若樣本濃度高于檢測(cè)范圍，需用標(biāo)準(zhǔn)品&樣本稀釋液稀釋后取樣)。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育90分鐘。提示：加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，避免產(chǎn)生氣泡。加樣時(shí)間宜控制在10分鐘內(nèi)。2、s物素化抗體/抗原：棄去液體，甩干，不用洗滌。每個(gè)孔中立即加入物素化抗體/抗原工作液100μL，混勻，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃孵育1小時(shí)。3、洗滌：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液350μL，浸泡1-2分鐘，吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。重復(fù)此洗板步驟3次。提示：此處與其他洗板步驟都可用洗板機(jī)。每一步洗滌充分是實(shí)驗(yàn)的根本。4、HRP酶結(jié)合物：每孔加酶結(jié)合物工作液100μL，混勻，加上覆膜，37℃孵育30分鐘。5、洗滌：棄去孔內(nèi)液體，洗板5次，方法同步驟3。6、底物：每孔加底物溶液(TMB)90μL，混勻，加上覆膜，37℃避光孵育15分鐘左右。提示：根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng)孵育時(shí)間，但不可超過(guò)30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)，即可終止。7、終止：每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)。提示：終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。8、讀值：立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀預(yù)熱，設(shè)置好檢測(cè)程序。9、實(shí)驗(yàn)完畢后，將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至保質(zhì)期。
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